ELISA試劑盒的基礎是抗原或者抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或者抗體任然保持其免疫學活性,酶標記的抗原或者抗體即保留其免疫學活性,又保留了酶的活性,在測定時受檢標本(測定其中的抗體或者抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他的物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或者抗體,也通過反應而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或者定量分析。由于酶的催化效率很高,間接的放大了免疫反應的結(jié)果,使測定方法達到很高的靈敏度。ELISA可用于測定抗原,也可以用于測定抗體。
ELSIA試劑盒導致結(jié)果過低的因素:
1)樣本蛋白含量高低直接影響所測濃度。
2)顯色時間過長可能導致OD值整體偏高以致zui高值>2.0,但此亦不影響相對濃度。
3)檢查酶標儀紫外光波長是否設置正確,此亦可能導致結(jié)果偏離,但不影響相對濃度。
4)仔細檢查標準品是否稀釋正確,簡單的辦法是看zui低濃度的那個吸光度值是不是高于說明書的1.5倍,若高,可能有問題。