CGRP試劑盒操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,并盡量避免起泡。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕?biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液 100μL,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100μL,注意不要有氣泡,加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育 90 分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每個孔中加入生物素化抗體工作液 100μL(在使用前 15 分鐘內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃溫育 1 小時。
3. 棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3 次,每次浸泡 1-2 分鐘,大約 350μL/每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
4. 每孔加酶結(jié)合物工作液(臨用前 15 分鐘內(nèi)配制)100μL,加上覆膜,37℃溫育 30 分鐘。
5. 棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 5 次,方法同步驟 3。
6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL,酶標(biāo)板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分鐘左右(根據(jù)實際顯se情況酌情縮短或延長,但不可超過 30 分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時,即可終止)。
7. 每孔加終止液 50μL,終止反應(yīng),此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同。
8. 立即用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測量各孔的光密度(OD 值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測程序。
9. 實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存。
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