許多試劑檢測都涉及到標準曲線的問題,標準曲線做的好與壞會直接影響到實驗的結(jié)果,甚至是關(guān)系到實驗的成敗,那么究竟如何繪制或制作標準曲線呢?
綿羊白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒做標準曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意:
1、樣品的濃度等指標是根據(jù)標準曲線計算出來的,所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,否則后面的實驗結(jié)果無從談起。
2、設(shè)置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內(nèi),包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度zui陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
3、采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度,這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。
4、檢測標準樣品時,應(yīng)按濃度遞增順序進行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準確性。
5、標準曲線的樣品數(shù)一般為7個點,但至少要保證有5個點。
6、做出的標準曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎樱话銇碚f,相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98,對于有些實驗,至少要0.99甚至是0.999.
注意事項:
1、試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2、濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3、各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間*控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4、請每次測定的同時做標準曲線,*做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6、底物請避光保存。
7、嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9、本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。