ELISA試劑盒在國內(nèi)有許多種叫法,例如:ELISA檢測試劑盒、ELISA 、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。
ELISA試劑盒加樣的優(yōu)化:在這一進程中,一般情況下有三次加樣,它們分別是加標(biāo)本,加酶物,加底物。凍住血清融解后,蛋白質(zhì)部分濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,防止氣泡,可上下倒置混和,不要在混勻器上劇烈振動。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑,而血清標(biāo)本只需待血清天然凝集、縮短后即可獲得。也可在板孔中參與稀釋液,再在其參與血清標(biāo)本,然后在微型顫動器上顫動1分鐘以確保混和。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,跨過一星期測定的需低溫冰存。
1、血清:用無菌管搜集,室溫血液自然凝固10-20分鐘,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細心搜集上清,保存過程中如出現(xiàn)堆積,應(yīng)再次離心。
2、尿液:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。細心搜集上清,保存過程中如有堆積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
3、血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求挑選EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細心搜集上清,保存過程中如有堆積構(gòu)成,應(yīng)該再次離心。
4、胸腹水:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細心搜集上清,保存過程中如有堆積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
5、腦脊液:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細心搜集上清,保存過程中如有堆積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
6、唾液:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細心搜集上清,保存過程中如有堆積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
7、細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管搜集。2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細心搜集上清,保存過程中如有堆積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
8、牛奶:用無菌管搜集,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),細心搜集上清,保存過程中如有堆積構(gòu)成,應(yīng)再次離心。
ELISA試劑盒檢測過程中的注意事項:
1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性,誤差不能超過2%??捎盟碗娮犹炱竭M行確定。但*有專業(yè)人員進行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時。
3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定。
4、實驗時,要使底物避光保存。
5、用槍吸取液體時速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
6、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
7、將液體加到酶標(biāo)孔中時,避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
8、液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。
9、溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。
10、洗板時,每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加*。沒有洗板機時,倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報紙或毛紙上用力拍干。
11、洗液不夠時,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
12、底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配。
13、檢測前,要打開酶標(biāo)儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上。
14、底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸。
15、待檢樣品要澄清,否則會影響結(jié)果。
16、溫浴時間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。
17、應(yīng)盡量做雙孔實驗,這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
18、對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。
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